小鼠胚胎發(fā)育由合子開始，經(jīng)過2細(xì)胞、4細(xì)胞、8細(xì)胞和桑椹胚，形成囊胚，之后繼續(xù)發(fā)育形成胚內(nèi)和胚外組織。具有最高潛能的干細(xì)胞被稱為全能性干細(xì)胞，一般指體內(nèi)的合子，2/4細(xì)胞，它可以發(fā)育到胚內(nèi)和胚外組織。多能性干細(xì)胞，一般來源于囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，它的發(fā)育潛能是受限的，只能發(fā)育到胚內(nèi)組織。1981年，人們首次在體外成功分離了第一株小鼠多能性胚胎干細(xì)胞系（ESC）。直到40年后的今天，所有培養(yǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞都處于多能狀態(tài)，人們一直致力于體外建立發(fā)育潛能更高的干細(xì)胞。表達(dá)全能性基因Zscan4s和Mervl的2C-like細(xì)胞是最早報(bào)道的能夠產(chǎn)生胚內(nèi)和胚外組織的細(xì)胞。
近日北京大學(xué)杜鵬課題組在Cell雜志在線發(fā)表了題為“Mouse totipotent stem cells captured and maintained through spliceosomal repression”的研究論文。在這項(xiàng)研究中，作者通過抑制剪接體，實(shí)現(xiàn)了小鼠全能性干細(xì)胞的體外建立和培養(yǎng)，且這種細(xì)胞在分子和功能上接近體內(nèi)2細(xì)胞和4細(xì)胞時(shí)期胚胎，因此被命名為totipotent blastomere-like cells（TBLCs）。
此項(xiàng)研究首次建立了體外捕獲和培養(yǎng)全能性干細(xì)胞的方法，而且令人驚奇的發(fā)現(xiàn)了揭示了剪接體在干細(xì)胞命運(yùn)轉(zhuǎn)變中的重要決定作用。故此，該成果不但對(duì)于早期胚胎發(fā)育相關(guān)的基礎(chǔ)研究提供了新的體外研究體系，同時(shí)也為未來干細(xì)胞相關(guān)的臨床醫(yī)學(xué)研究提供了新型的發(fā)育潛能極高的“種子細(xì)胞”來源。
全式金慢病毒產(chǎn)品TransLvTM Lentivirus qPCR Titration Kit (FV201)被該團(tuán)隊(duì)選中，為慢病毒滴度滴定實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)提供了強(qiáng)有力的保障。
本產(chǎn)品提供了一種利用qPCR方法檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞中整合的前病毒序列拷貝數(shù)的方法。慢病毒包裝后轉(zhuǎn)導(dǎo)易感細(xì)胞 (如HT1080，HEK-293T等)，提取慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞基因組，進(jìn)行qPCR反應(yīng)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線Cq值計(jì)算整合的前病毒拷貝數(shù)，進(jìn)而得到確定的慢病毒滴度。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
★ 操作簡(jiǎn)單、靈敏度高。
★ 提供內(nèi)參基因作為參照，測(cè)得慢病毒滴度更準(zhǔn)確。
★ 兼容第二代和第三代HIV-1 慢病毒包裝載體。
★ 檢測(cè)范圍廣，標(biāo)準(zhǔn)曲線在103-108 copies/μl 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
主要步驟圖
上圖表示Provirus Gene ( 藍(lán)色) 和Reference Gene ( 紅色) 以各標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的Cq 值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)拷貝數(shù)Log 值為橫坐標(biāo)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中Provirus Gene R2= 1.000，擴(kuò)增效率為97.1%；Reference Gene R2= 0.999，擴(kuò)增效率為95.8%。
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